總膽汁酸(TBA)測定試劑盒的使用方法因試劑盒的具體類型(如ELISA法、循環(huán)酶法等)和制造商的不同而有所差異。以下是一種基于ELISA法的總膽汁酸測定試劑盒使用方法的概述,供您參考:
一、準備工作
樣本準備:根據試劑盒要求準備待測樣本,如血清、血漿等。確保樣本收集后及時處理,避免污染和反復凍融。
試劑準備:將試劑盒從冰箱中取出,室溫平衡20分鐘。檢查試劑盒內的試劑是否齊全,包括標準品、檢測抗體、洗滌液等。
儀器準備:準備好酶標儀(波長設定為450nm)、高精度加樣器及槍頭等。
二、操作步驟
設置標準品孔和樣本孔:在微孔板中設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(注意:具體操作量可能因試劑盒而異,請參照說明書)。
加入檢測抗體:除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL(或其他指定量的檢測抗體),用封板膜封住反應孔。
溫育:將微孔板置于37℃水浴鍋或恒溫箱中溫育60分鐘(具體時間根據說明書)。
洗滌:溫育結束后,棄去孔內液體,用洗滌液洗滌5次,每次洗滌后需在吸水紙上拍干。
顯色:每孔加入底物A、B各50μL(或其他指定量的底物),37℃避光孵育15分鐘。
終止反應:每孔加入終止液50μL,終止顯色反應。
測定吸光度:在450nm波長下,用酶標儀測定各孔的吸光度(OD值)。
三、結果計算
繪制標準曲線:以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,在Excel工作表中繪制出標準品線性回歸曲線。
計算樣本濃度:根據標準曲線方程,計算各樣本的濃度值。注意,如果樣本在檢測前已經稀釋,最終結果需要乘以相應的稀釋倍數(shù)。
四、注意事項
操作規(guī)范:嚴格按照說明書中的操作步驟進行,避免交叉污染。
樣本保存:樣本收集后應及時處理,如需保存,請按說明書要求分裝并凍存于-20℃,避免反復凍融。
試劑保存:試劑盒應保存在2-8℃條件下,避免陽光直射和高溫。
儀器校準:使用前應對酶標儀進行校準,確保測定結果的準確性。
請注意,以上僅為一種基于ELISA法的總膽汁酸測定試劑盒使用方法的概述。不同品牌和型號的試劑盒可能有所差異,請在使用前仔細閱讀產品說明書并遵循其指導進行操作。